ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
免疫标记技术：
将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。具体可分为放射免疫测定法、免疫荧光技术和免疫酶测定法。其中，免疫酶测定法是指用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应，一般采用辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP），其特点有：
A.高度特异性；
B.高灵敏度；
C.定性定量检测。
在免疫测定的应用：
1、体液中的各种蛋白质；
2、激素；
3、抗生素和药物；
4、病原体抗原；
5、利用纯化的抗原检测标本中的抗体。
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