土壤酸性木聚糖酶测定试剂盒说明书

土壤酸性木聚糖酶（Soil Acidic Xylanase，S-ACX）测定试剂盒说明书

                                                     微量法100T/48S

注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，ACX一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。

测定原理：

ACX在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算ACX活力。

自备实验用品及仪器：

天平、常温离心机、震荡仪、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制：

缓冲液：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

样品处理

新鲜土样风干，过30-50目筛。

测定操作表：

1、   分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至540nm。

2、   操作表

S-ACX计算公式：

a.        用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 2.5554x - 0.002 ，R² = 0.9983

酶活定义：50℃，pH4.8条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酶活单位。

S-ACX活力（μmol/d/g土样）= （△A+0.002）÷ 2.5554 ×V反总×10³÷ W÷T÷ 150

                       =18.78 ×（△A+0.002）÷ W

V反总：反应总体积，0.15mL；T：反应时间，1/48d；1000：1mmol/L =10³μmol/L；150：木糖分子量。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 1.2777x - 0.002 ，R² = 0.9983

酶活定义：50℃，pH4.8条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酶活单位。

S-ACX活力（μmol/d/g土样）=（△A+0.002）÷1.2777×V反总×10³÷ W÷T÷ 150

                       = 37.56 ×（△A+0.002）÷ W

V反总：反应总体积，0.15mL；T：反应时间，1/48d；1000：1mmol/L =10³μmol/L；150：木糖分子量。

注意事项：

1. 保证震荡反应30min，使酶与底物充分接触。

2. 注意90℃水浴防止爆开，以免改变反应体系。