土壤有效硅试剂盒说明书
微量法100T/96S
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
硅元素是一种十分重要的植物营养元素,土壤中有效硅含量影响着植物的光合作用、呼吸作用以及对逆境的抗性。
测定原理:
硅酸根与钼酸铵在弱酸条件下生成硅钼酸,可被还原剂还原成硅钼蓝,在700nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、常温离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪。
试剂组成和配制:
提取液:液体105mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入4mL试剂四溶剂充分溶解。
试剂四溶剂:液体4mL×1瓶,4℃保存。
样本处理:
新鲜土样风干,过20目筛,按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为1:5的比例(建议称取约0.2g土样,加入1mL提取液),振荡提取1h,10000g ,25℃离心10min,取上清液待测。
测定操作表:
空白管 | 测定管 | |
样本(μL) | 40 | |
提取液(μL) | 40 | |
试剂一(μL) | 40 | 40 |
混匀,35℃,15min | ||
试剂二(μL) | 40 | 40 |
混匀,25℃,10min | ||
试剂三(μL) | 40 | 40 |
试剂四(μL) | 40 | 40 |
充分混匀,25℃静置30min | ||
于微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定700nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管 |
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0933x -0.0523,R2 = 0.9992
有效硅含量(mg/kg)=(△A+0.0523)÷ 0.0933×V反总÷(W×V样÷V样总)
= 53.6×(△A+0.0523)÷W
V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0467x -0.0523,R2 = 0.9992
有效硅含量(mg/kg)=(△A+0.0523)÷ 0.0467×V反总÷(W×V样÷V样总)
= 107.2×(△A+0.0523)÷W
V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
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