土壤植酸酶（phytase）试剂盒说明书

土壤植酸酶（phytase）试剂盒说明书                                                                                                                                                                                                

微量法100T/48S

注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。

测定原理：

植酸酶在一定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸收峰，根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、恒温水浴锅，甲苯（不允许快递）。

试剂的组成和配制：

缓冲液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加缓冲液30mL配制，现用现配；用不完的试剂4℃保存一个月。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。

显色剂：粉剂×6管，4℃避光保存，临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解，再加1.6mL试剂二混匀。

样本处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定操作表：

酶活性计算公式：

标准曲线：y = 0.8795x + 0.0084，R² = 0.9977；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值△A。

酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每克土样每小时从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。

植酸酶活性（μmol/h /g 土样）=（△A-0.0084）÷0.8795×V反总÷W÷T

                             =0.82×（△A-0.0084）

V反总：反应总体积，0.52mL；T：反应时间，24h；W：样本质量，0.03g。

注意事项：

1、显色剂需要临用前根据用量配制，每一瓶是10个样本的用量，新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期，应放弃使用。

2、ΔA线性范围为0.01-0.5。