果糖-1,6-二磷酸（Fructose-1,6 Diphosphate，FDP）试剂盒说明书

果糖-1,6-二磷酸（Fructose-1,6 Diphosphate，FDP）试剂盒说明书

                                                    微量法100T/96S

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

果糖1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂，是糖酵解途径的重要中间体，广泛存在于动植物和微生物体内，能影响细胞内钾离子的浓度，改善葡萄糖和其他能量底物的代谢，促进组织氧的释放，广泛应用于临床医药制剂。

测定原理：

醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸降解，产物与DNPH缩合成紫红色物质，在540nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制：

试剂一：液体110mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体0.4mL×1支，4℃避光保存。

试剂三：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体16mL×1瓶，4℃保存。

样品处理：

1.        组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。

2.        细胞：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清待测。

3.        液体：直接检测。

测定操作：

计算公式：

a.        用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y= 0.6971x+0.0012，R²=0.9983

1．按照质量计算

FDP（mg/g 鲜重）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（W÷V样总）

= 1.43×(△A-0.0012)÷W

2．按照细胞数量计算

FDP（mg/10⁴ cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（细胞数量÷V样总）

=1.43×(△A-0.0012)÷细胞数量

3．按照液体体积计算

FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971

= 1.43×(△A-0.0012)

W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL

b.       用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y= 0.3486x+0.0012，R²=0.9983

1．按照质量计算

FDP（mg/g 鲜重）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（W÷V样总）

= 2.87×(△A-0.0012)÷W

2．按照细胞数量计算

FDP（mg/10⁴ cell）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（细胞数量÷V样总）

= 2.87×(△A-0.0012)÷细胞数量

3．按照液体体积计算

FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.3486

= 2.87×(△A-0.0012)

W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL

注意事项：

Z低检出限为1.72 mg/L。